冷冻保存和辅助复制
转基因小鼠的产生昂贵且耗时。由于这项投资，对于在感染或灾难的情况下，可以对损失线的可能性来防范胚胎的银行胚胎是明智的。此外，在项目结束时，通常希望在未来需要的最终性中维护一条线。在这种情况下，维护线路以及占用宝贵的动物空间可能是昂贵的。为了容纳其中任何一种情况，转基因鼠标设施（GEMF）提供鼠标冷冻保存服务。
胚胎冷冻保存
我们将冷冻保存200个2细胞胚胎给与野生型或纯合子的雌性交配的杂合子雄性(对于那些适合该程序的品系)，或100个2细胞胚胎给与野生型或纯合子的雌性交配的纯合子雄性。GEMF工作人员将从感兴趣的小鼠系中收集大约200或100个双细胞胚胎或压缩桑葚胚(取决于合子度)，低温保存并储存在液氮中。至少需要10只8周到6个月大的雄性。如果研究人员想冷冻纯合子，就需要提供超排卵的女性。对于C57BL/6和129株，使用时雌性应在21-25日龄。我们平均从一个C57BL/6或杂交，非转基因，超排卵的雌性与一个可育的雄性交配，得到15个良好的胚胎。如果可以将小鼠冷冻为杂合子，GEMF将获得正确年龄的非转基因雌性小鼠。GEMF将超排卵的女性纯合子和杂合子菌株。为了验证该程序是否成功，每次冷冻一根吸管将被解冻，胚胎将被培养到囊胚阶段。如果小鼠系不能作为胚胎冷冻保存，我们将只冷冻该系的精子。 While we are generally very successful at producing animals from frozen sperm, there are outside sources that we can recommend for recovery of the line from inactive sperm, if this proves necessary.
成本
MD Anderson调查员1,100美元/课程/会议;$ 1,640 / Line / Session for MD Anderson-附属调查员;其他外部调查员2,660美元/线/赛季
胚胎冷冻保存的时间线
第1天
- 向女性施用PM
- 向女性和伴侣施用HCG
- 将女性转移到单独的笼子里
第6天
- 冲洗输卵管收集森拉和冻结
- 一根稻草过夜文化
第7天
- 在过夜培养中计算胚泡
从GEMF获取服务
- 通过致电713-795-2654或电子邮件安排Jan Parker-Thornburg预约jpthorn@mdanderson.org.审查要冷冻保存的动物类型和所需的动物数量
- 登录到https://mdanderson.ilabsolutions.com.，注册一个帐户，然后去网站请求服务
- 阅读政策和程序章节以获取有关GEMF提供的服务的重要信息。
精子冷冻保存
我们现在利用Naomi Nakagata最初发布的EMMA协议作为我们的精子冷冻保存方法[Otermeier GC等等。PLOS一个3（7）：E2792]。调查员需要在收到在线服务请求时根据GEMF设置的计划提供两只雄性小鼠。每只雄性的11种皮脂将被冷冻并储存在GEMF中。为了测试该程序的完整性，我们将使用每只雄性的一根吸管用野生型卵母细胞进行IVF，这将被孵育到两种细胞阶段以建立施肥率。
成本
MD Anderson调查员1,100美元/课程/会议;$ 1,640 / Line / Session for MD Anderson-附属调查员;其他外部调查员2,660美元/线/赛季
精子冷冻保存的时间线
第1天
- 将两到四个男性交配给PI殖民地提供的非必需女性
第5天
- 蒙特尔被灭绝，以允许精子恢复
第10天和11天
- 雄性被带到Gemf Cryo实验室，用于牺牲和精子恢复和冷冻保存
约。第17天
- 每只雄性的一个精子样品被解冻并与未受精的卵母细胞混合以允许体外施肥。四小时后，洗涤卵母细胞并使其孵育过夜
约。第18天
- 对体外受精产生的双细胞胚胎进行计数，并计算精子样本的受精率。项目已完成
从GEMF获取服务
- 登录到https://mdanderson.ilabsolutions.com.，注册一个帐户，然后去网站请求服务
- GEMF技术人员将在冷冻保存程序之前与交配协议的详细信息与您联系
- 您将在预先安排的Gemf技术人员预先安排妥善交配的雄性
- 项目完成后将收到通知
IVF-冷冻保存
由于调查人员通常难以生产15-20种肥沃的胚胎冷冻保存，我们还提供IVF-CryreveReservation程序的选择。对于此程序，我们将需要两到四至四个最佳肥沃的雄性。将处死雄性以获得与卵母细胞混合的精子体外．产生的双细胞胚胎将玻璃化并储存以供将来使用。虽然该程序在调查员上更容易，但由于所需的技术时间量，这项服务通常会有很长的等待时间．在胚胎冷冻保存过程中，我们将保存200个来自杂合x野生型的胚胎和100个来自纯合x野生型的胚胎。所有程序都将通过解冻一小部分胚胎并确定存活情况来进行测试。
成本
MD安德森的调查人员每条生产线每节课1700美元;MD安德森附属研究人员每组2363美元;其他外部调查人员每针$3,830
IVF-Cryremeservation的时间线
第1天
- 将两到四个男性交配给PI殖民地提供的非必需女性
第5天
- 蒙特尔被灭绝，以允许精子恢复
第10天和11天
- 雄性被带到GEMF冷冻实验室进行牺牲、精子恢复、试管受精和冷冻保存
约。第17天
- 将一个精子样品与未受精卵母细胞混合以允许体外施肥。四小时后，洗涤卵母细胞并使其孵育过夜
约。第18天
- 对体外受精产生的双细胞胚胎进行计数，并计算精子样本的受精率。所有双细胞胚胎都被玻璃化并保存在液氮中。一小组胚胎被解冻以确定存活率。成功玻璃化200个胚胎后(如果使用纯合子男性，则为100个胚胎)，项目完成。(注:如果没有获得所需数量的胚胎，研究人员将额外支付一笔费用来重复该项目。)
从GEMF获取服务
- 登录到https://mdanderson.ilabsolutions.com.，注册一个帐户，然后去网站请求服务
- GEMF技术人员将与您联系，并在项目启动之前与等待时间的详细信息，以及在冷冻保存程序之前的配合协议
- 您将在预先安排的Gemf技术人员预先安排妥善交配的雄性
- 项目完成后将收到通知