政策和程序
DNA重组实验
由于原核注射和胚胎干细胞电穿孔利用独特的DNA序列重组进入小鼠基因组,因此在开始这些实验之前,主要研究者需要向GEMF提供来自机构生物安全委员会(IBC)的批准号。
动物使用
在此之前生产的任何转基因或嵌合体小鼠,并进行存档或辅助生殖(试管婴儿),所有调查员都需要通过获得获得批准,从MD安德森研究合规动物研究MD安德森动物护理和使用表单(eACUF)188bet体育网址。没有有效的动物使用协议号的GEMF不能启动任何动物实验。
保密
所有与实验相关的信息将由GEMF完全保密。除非经主要研究者同意,否则不得分享任何与实验相关的知识。
付款
在GEMF开始服务之前,必须提交一份带有核准图串编号的项目申请表格。此表格将在服务执行时提交帐单。
出版物
MD安德森的基因工程小鼠设施部分是由美国国家癌症研究所的癌症中心资助的。因此,GEMF提供的服务所产生的所有出版物必须在确认一节中注明设施。所有由GEMF创作的动物发表的论文都应提交给Jan Parker-Thornburg(基因部,1010单元)。
调度
服务将在收到所有相关表格和文件后安排。
实验具体政策
囊胚注射
提供给该设施的胚胎干细胞将在视觉检查其形态后注射。状况不佳的细胞将不会被注射,而且研究者可能会为收集囊胚收取额外的费用。为了避免不必要的动物使用,我们要求在一周内取消注射日期。对于由GEMF产生的细胞,如果初始克隆不能产生嵌合体,我们将用另一克隆代替注射。对于在GEMF之外产生的细胞,我们只保证注射50个囊胚。
胚胎干细胞的基因靶向
研究者负责通过提供初步实验结果,通过5'和3'探针的Southern分析,证明一种可靠的鉴定靶向ES细胞克隆的方案。如果做了适当的对照实验,PCR分析可能适用于分析。(请致电Jan Parker-Thornburg获取更多关于PCR分析认证的信息。)在启动基因靶向实验之前,必须证明一种令人信服的识别突变等位基因的策略。
原核的注入
我们的工厂已通过原核注射产生的成千上万的创始人线。对于标准的DNA结构,我们会产生三种DNA创始人动物。虽然通常可以显示出结合到基因组DNA,所述基因可以或可以不表现出表达。它并不总是能够预测转基因是否表达及其在小鼠表达的影响。出于这个原因,GEMF不能保证转基因表达。研究者负责用于展示通过提供从试实验的结果用于该目的识别在单拷贝水平转基因的检测的可靠方案。该GEMF将根据要求提供用于单拷贝检测协议。
使用CRISPR/Cas9或其他基因编辑核酸酶的原核注射基因打靶
GEMF将通过原核注射小鼠胚胎来注射CRISPR/Cas9或其他基因编辑内切酶的成分,从而产生基因靶向动物,包括敲除动物和敲入动物。我们要求注射用的成分由GEMF或经批准的公司生产(建议请联系我们)。每个项目我们将进行5天的注射,但不能保证幼崽或目标动物。请联系简帕克-索恩伯格之前,启动一个项目的细节,将有助于项目的成功。
胚胎冷冻保存
虽然胚胎冷冻保存是保存小鼠资源的一种有价值的工具,但某些小鼠品系不适合这项技术的严格要求。出于这个原因,必须了解要低温保存的菌株的遗传背景。GEMF将解冻冷冻胚胎的一根吸管,并培养一夜至囊胚期,以确保胚胎冷冻对特定的小鼠系是可行的。
精子冷冻保存
对于精子低温保存,研究人员将会得到一个安排,以便让雄性进行预交配,以促进新的精子产生。每个男性的冷冻精子将通过试管受精测试其受精能力。