鼠标资源设施
小鼠资源设施(MRF)于1999年加入GEMF,作为满足小鼠试剂需求的一种手段。MRF储存了大量的小鼠试剂,包括基因组DNA、用于DNA构建的质粒和用于超排卵的激素。此外,MRF维持了一小群Cre和lacZ转基因小鼠和其他报告小鼠。提供这些试剂的费用很少,以支付维护费用。
质粒
MRF储存了多种通常用于构建DNA以操纵小鼠基因组的质粒。这些质粒包括含有G418耐药新霉素基因的质粒、含有crei - loxp的质粒、含有FLP重组酶使用的FRT位点的质粒、含有LacZ的质粒以及其他各种有用的质粒。
以下质粒可由研究者获得用于生成靶向结构。5微升(5- l)选择的质粒将提供给研究者进行细菌转化。
PGK-NEO-BPA loxA
含有PGK启动子表达的新霉素抗性基因,带有牛生长激素聚A位点,两侧带有lox P位点,便于去除。使用的向量是pBluescript II KS(-)。方向性是从T3至T7启动子(A)。
PGK-Neo-bpA loxB
含有PGK启动子表达的新霉素抗性基因,带有牛生长激素聚A位点,两侧带有lox P位点,便于去除。使用的向量是pBluescript II KS(-)。定向性是从T7启动子到T3启动子(B)。
pMC1TKbpA
包含多克隆位点之间一个TK盒。来自Allen Bradley的获得。
PGK-Neo-bpA FRT
包含与牛生长激素聚A位点的PGK启动子表达并侧接FRT位点与FLP重组酶去除新霉素抗性基因。
IRES-Cre-pA FRT2 PGK-Neo-bpA
包含一个2.4 kb的XhoI/SmaI片段,其中包含从质粒ires - crei - pa中获得的ires - crei - pa基因,以及从pBluescript II KS(-)中的质粒frt - pgc - neo - bpa FRT-6中获得的2.5 kb的EcoRV/BamHI片段。neo基因两侧有FRT位点,可以用flp重组酶去除。
PGK-HYGRO
包含PGK启动子表达的耐湿黴素基因。该基因的两侧有多个克隆位点。
IRES-Cre-pA
含有含有IRES-Cre的XhoI/BamHI片段约1.0 kb,含有含有pOG231质粒Cre的polyA位点的BamHI/SalI片段约1.4 kb,均在pBluescript II KS(-)中。
pIRES-T-lacZ / loxP-Neo
包含一个可以从IRES表达的tau-LacZ基因,以及一个从PGK启动子表达的loxp -侧翼neo基因。LacZ基因和neo基因都有多克隆位点。
pPGK-puro-bpA-loxP
含有从带有牛生长激素polyA位点的PGK启动子中表达的puromyin耐药基因,两侧有lox P位点便于去除。
pOG231
CMV启动子中普遍表达的含有Cre基因的质粒。Steve O'Gorman提供。
pCAGG-Flpe
一种含有从CMV启动子中表达的flp-重组酶的质粒,该质粒被操纵以符合Kozak共识序列以获得更高水平的表达。来自弗朗西斯·斯图尔特。
费用:质粒不收费
鼠标的资源
MRF保留了少量含有Cre、GFP和lacz的小鼠,并将根据MD Anderson研究人员的要求(仅限)分发这些小鼠。188bet体育网址要确定哪些鼠标是可用的,请联系Jan Parker-Thornburg。
小鼠不能被送到外部研究人员那里。然而,GEMF将乐于向外部调查人员提供订购信息。
CMV-Cre重组酶的小鼠
转基因小鼠CMV-Cre基因。Cre在所有细胞中均有组成性表达。这些小鼠处于C57BL/6背景。
R26R老鼠
用于报告将Cre表达的小鼠。甲ROSA26-loxP的新-loxP的lacZ基因被靶向ROSA26基因座(Soriano的P. [1999]广义的lacZ表达与ROSA26 CRE报道菌株。自然遗传学21,70-71。)组成型的,高水平的表达lacZ基因被认为是在所有小区,如果酶Cre重组除去neo抗性基因。这些小鼠在C57BL / 6:129杂交的背景。
Zp3-Cre老鼠
含有Zp3启动子表达的Cre重组酶基因的C57BL/6转基因小鼠。Cre在第一次减数分裂完成前仅在生长的卵母细胞中表达。(Lewandoski M, Montzka Wassarman K, Martin GR [1997] Zp3-cre,一种专门用于雌性生殖系中loxp侧靶基因激活或失活的转基因小鼠系。当代生物学7,148-151。)
flp老鼠
用于广义高水平的Flp小鼠的deletor应变重组酶表达。的ROSA26-基因靶向与位点特异性重组酶FLP的增强版本(法利FW,Sorioano P,斯特芬LS,Dymecki SM [2000]。使用FLPeR(脚蹼)小鼠广泛重组酶表达。成因28,106-110。)构,FLPE的高水平表达被认为是在所有单元格。这些小鼠在129后台。
常染色体GFP
小鼠携带由鸡β-肌动蛋白启动子和CMV中间早期增强驱动的绿色荧光蛋白。“该菌株可以作为荧光标记的细胞或组织的来源的转基因在所有有核胚胎组织中表达...尽管普遍存在的,表达水平不同的器官之间变化。”(杰克逊实验室网站:应变003115)。该菌株的参考是Hadjantonakis AK,Gertsenstein男,伊川男,冈部男,纳吉A.(1998)。由绿色荧光ES细胞的种系传递产生绿色荧光小鼠。机甲。开发。76,79-90。
成本:每只鼠标39美元。对于多余的家畜(非转基因、退休的饲养者),每只老鼠要收取17美元的费用。
供应
GEMF可为ES细胞培养、胚胎运输和超排卵提供少量化学物质。我们也可以为C57BL/6和BL/6白化菌株提供胚泡培养的morulae。每种化学品的成本取决于生产成本。
训练
该GEMF可在原核注射和胚胎干细胞培养班火车限制了人口的数字。这通常是一个一对一的培训,也需要从学员大量时间的承诺。为了避免交叉污染,学员不能用自己的小鼠中之前将在日常训练来工作。
联系
要获得试剂,请登录到https://mdanderson.ilabsolutions.com,注册一个账号,然后去到现场请求服务。