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为了更好地理解精氨酸甲基化的生物学作用，我们的研究小组使用了许多不同的生物学方法来研究PRMT功能。188bet体育网址这些包括小鼠获得和丧失功能的PRMT模型，筛选甲基结合蛋白的蛋白微阵列，筛选PRMT底物的生化筛选，以及筛选PRMT家族成员的化学抑制剂。
基因敲除小鼠模型
我们已经产生了一些小鼠精氨酸甲基转移酶基因在揭露细胞和组织特定的角色为这个翻译后修饰的希望有针对性的破坏。
目前我们手头上有CARM1、PRMT3和PRMT6缺失小鼠。我们正在对这些无基因小鼠进行转录组分析(RNA-seq)和ChIP-seq，以确定它们调控的全部基因。我们还执行了两次敲除，以调查不同PRMTs之间的冗余。
增益的功能小鼠模型
我们也正在建立功能获得转基因小鼠模型，以确定PRMT在体内过表达的影响。这些是可以通过与组织特异性cre系杂交而激活的转基因小鼠。Cre表达移除lox/STOP/los卡带并激活PRMT的表达。
我们已经产生使用这种方法PRMT6增益的功能小鼠。我们使用相同的方法目前生产CARM1，PRMT1，PRMT5和TDRD3转基因小鼠。
蛋白质阵列与分析核心
蛋白质结构域是进化保守的蛋白内发现，用作信令单元基序。某些基序可以用于在识别特定的翻译后修饰，从而允许蛋白质 - 蛋白质相互作用的调节发生。我们的实验室已开发出有价值的蛋白质阵列平台鉴定结合修饰肽蛋白结构域。我们的大部分努力都集中在鉴定蛋白质结构域“改为”组蛋白密码。
蛋白质阵列和分析的核心已被确立为被一个新的设施中心环境与分子致癌。核心提供了我们的蛋白结构域微阵列，一种高通量技术，以促进研究人员识别新的蛋白质-蛋白质相互作用。
蛋白质Macroarray屏幕
蛋白质宏阵列技术是用于高通量筛选平行酶 - 底物，蛋白 - 配体或蛋白质化学化合物，和蛋白质 - 蛋白质相互作用的一个强有力的工具。使用这种方法，我们已经成功地确定了一些对CARM1以及PRMT1基板。现在，我们正在利用这个方法来鉴定蛋白质与生物素化小分子相互作用。
潘抗体方法
我们正在开发和鉴定识别MMA、ADMA和SDMA基序的抗体。这将使我们能够筛选和表征PRMT基质。例如，为了识别新的CARM1底物，我们使用混合抗原池生成了pan-CARM1底物抗体，该抗原池含有许多已知CARM1底物的甲基基序。这些抗体然后被用来富集CARM1甲基化蛋白，然后被质谱鉴定。
这些推定的基片的一个子集已被选定为进一步评估。功能性研究，以确定甲基化对这些基材的意义将有助于我们更好地了解的CARM1作为一个转录共激活因子作用。
TAP / MS方法来研究蛋白质复合物
我们使用串联亲和纯化(TAP)/质谱技术来研究蛋白质-蛋白质相互作用。我们已经产生了许多表达TAP标记的表观遗传调控因子的稳定细胞系。这些稳定系包括异位PRMT6、PRMT7、PHF20和TDRD3。
带有TAP标记的蛋白质首先与IgG珠结合。蛋白质复合物然后通过TEV酶消化标签上的连接区域释放出来。链霉亲和素珠用于第二轮结合。洗脱后，蛋白复合物准备用于质谱鉴定。
化学抑制剂
小分子充当酶功能的化学调节剂可用于探测蛋白质功能和用作治疗剂的有价值的工具。最甲基转移酶使用的甲基供体S-腺苷-L-甲硫氨酸（的AdoMet）作为辅因子。当前甲基转移酶抑制剂显示有限的特异性，不加区别地定位使用的AdoMet的所有酶。我们已经设计并实现了高通量筛选小分子的鉴定特异性抑制蛋白精氨酸N-甲基转移酶（PRMT）的活性。使用这种方法，我们已经确定了先导化合物，AMI-1，抑制PRMT活动，但不是赖氨酸甲基。
我们一直与药物化学家合作，以确定AMI-1类似物，将显示更好的特异性和细胞的通透性。我们也有兴趣在鉴定的化合物，其结合于甲基结合蛋白结构域的芳香笼。我们预计，以确定将阻止依赖甲基蛋白质 - 蛋白质相互作用的化合物。